产品货号:
HR0384
中文名称:
膜蛋白纯化试剂盒
英文名称:
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于从各类蛋白样品中纯化膜蛋白,包括动物、植物、细菌、真菌、酵母等蛋白粗样品,纯化过程简单方便,可在1小时内完成。经纯化后的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。纯化的膜蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。本试剂盒纯化的样品不可用于双向电泳分析,需要用于双向电泳分析的请选用本公司其他货号的产品。
膜蛋白承担各种生物功能,在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套,因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构,因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
组分 | 50T | 100T |
蛋白溶解液 | 5mL | 10mL |
试剂A | 20mL | 40mL |
试剂B | 10mL | 20mL |
保存:2~8℃,有效期1年。
移液器、离心机、涡旋振荡器
可以根据自己实验需要加入蛋白酶抑制剂。
- 取约1~3mg冻干蛋白样品,用100μL蛋白溶解液充分溶解。若是液体蛋白样品,此步骤省略。
- 在100μL溶解的蛋白样品中(或者直接取100~200μL蛋白样品)加入200μL冷的试剂A,充分混匀。
- 在37℃水浴5~10分钟,37℃ 2000×g离心5分钟,此时溶液应分为两层,下层约为30μL~50μL。
- 必需保证在37℃左右下离心,至少确保30℃以上。无可控温的离心机时,用常温的离心机在室温离心即可,适当缩短离心时间至1~2分钟。
- 收集收集上层留作备用分析。
- 进行下游实验时,可以取一个上层样品同时进行实验分析。
- 在下层液体中加入80~150μL试剂B,充分混匀,即得膜蛋白。
- 为了进一步提高纯度,可以在此下层液体中再次加入200μL冷的试剂A,充分混匀后,按步骤3起再次提取一遍。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
- 用BCA法进行蛋白定量。
- 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
- 用BCA法进行蛋白定量。
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